Dowody na transmisję wirusa Camel-to-Human z koronawirusa MERS AD 2

CT oznacza tomografię komputerową. Pięć dni po hospitalizacji pacjenta u 18-letniej córeczki rozwinęły się objawy zakażenia górnych dróg oddechowych i ustąpiły samoistnie w ciągu 3 dni bez żadnych komplikacji. Po przyjęciu stan pacjenta nadal się pogarszał i zmarł w dniu 18 listopada 2013 r. Rysunek pokazuje harmonogram głównych wydarzeń. Szczegółowe informacje dotyczące oceny klinicznej i przebiegu w szpitalu znajdują się w dodatkowym dodatku (dostępnym wraz z pełnym tekstem tego artykułu), w tym w badaniach laboratoryjnych (tabela S1), radiografii klatki piersiowej (ryc. S1) i tomografii komputerowej (ryc. S2) .
Metody
Badania terenowe
Pięć dni po przyjęciu pacjenta do szpitala weterynarz zbadał dziewięć wielbłądów, procedurę tę powtarzano przez kolejne 27 dni. Podczas tych badań stwierdzono, że wielbłądy są całkowicie zdrowe, bez wydzieliny z nosa.
Pobieranie próbki
Wymazy z nosa pobierano od pacjenta w dniach 1, 4, 14 i 16 w szpitalu. Próbki krwi pobierano również od pacjenta w dniach i 14. Ponadto pobierano wymaz z nosa od córki pacjenta dzień po wystąpieniu jej choroby. Sześć dni po przyjęciu pacjenta pobierano próbki krwi od jego trzech przyjaciół, którzy byli bezobjawowi. Wymazy z nosa, krew, mleko, mocz i odbyt pobierano z dziewięciu wielbłądów 5 dni po przyjęciu pacjenta. Próbki krwi i nosa zebrano ponownie z wielbłądów 28 dni później (tj. 33 dni po przyjęciu pacjenta do szpitala). Wszystkie wymazy z nosa, które zanurzono w wirusowym ośrodku transportowym, oraz inne próbki transportowano w zimnym pojemniku do Oddziału Specjalnych Agentów Zakaźnych, laboratorium Biomafety poziomu 3 w King Fahd Medical Research Center, King Abdulaziz University, Dżudda, do analizy. Próbki krwi odwirowano i pobrano próbki surowicy do analizy.
Hodowlę komórkową
Komórki Vero (ATCC CCL-81) zaszczepiono 100 .l podłoża do wymazu z nosa i utrzymywano w kompletnej pożywce Eagle a zmodyfikowanej Dulbecco, jak opisano poprzednio.4. Komórki inkubowano w wilgotnej atmosferze w 37 ° C w 5% dwutlenku węgla i codziennie badane pod kątem efektu cytopatycznego. Supernatanty z hodowli komórkowych zbierano, gdy obserwowano efekt cytopatyczny i analizowano za pomocą RT-PCR w czasie rzeczywistym. Izolat MERS-CoV wygenerowany z pierwszego pasażu hodowlanego zastosowano do całego sekwencjonowania wirusowego genomu.
Detekcja molekularna
RNA ekstrahowano z wymazów z nosa lub supernatantów z hodowli przy użyciu zestawu QIAamp Viral RNA Mini Kit (Qiagen), zgodnie z instrukcjami producenta
[przypisy: objawy endometriozy, endometrioza stopnie, pracownia emg ]

Powiązane tematy z artykułem: endometrioza stopnie objawy endometriozy pracownia emg